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學習重點 脂解酶（lipase，亦稱解脂酶）催化脂肪受質水解；測定活性時，可追蹤脂肪酸的生成，或脂肪乳劑濁度的變化。 pH-stat 自動電位滴定法以鹼液中和脂解反應釋出的脂肪酸，維持設定的 pH，再由單位時間消耗的鹼量推算血清脂解酶活性。 以 340 nm 監測脂肪乳劑的測定法，觀察的是濁度（turbidity）變化，不能只憑波長就判定為 NADH 或 NADPH 的變化。 膽鹽（bile salt）可用於脂解酶測定試劑，協助脂質受質乳化與分散；看到此試劑線索，應聯想到 lipase。 核心觀念 一、先分清「測定酵素活性」與「測定酵素含量」 酵素活性測定關心的是酵素在一定條件下，單位時間能催化多少反應。因此，檢驗不一定直接測量脂解酶本身，而是利用受質減少、產物增加，或反應液物理性質的變化，間接反映其催化速率。 脂解酶能水解三酸甘油酯的酯鍵，釋出游離脂肪酸，並形成部分甘油酯等產物。理解本單元時，應抓住兩個可量測的結果：脂肪酸生成可供滴定；乳化脂肪受質被水解可造成濁度改變。不同方法追蹤的訊號不同，但目的都是推算脂解酶活性。 二、pH-stat 自動電位滴定法：測脂肪酸生成速率 pH-stat automated potentiometric titrator指能自動維持設定 pH 的電位滴定系統。用於脂解酶測定時，脂肪受質被水解，釋出的脂肪酸使反應液具有酸化趨勢；儀器以電極持續監測 pH，並自動加入鹼液中和，使反應液維持在設定值附近。 其判讀流程是：脂解酶水解脂肪 → 釋出脂肪酸 → 自動加入鹼液中和 → 依鹼液消耗速率推算活性。在測定條件固定且位於適用測量範圍內時，脂解酶活性越高，單位時間生成的脂肪酸越多，所需鹼液也越多。 此法的關鍵是維持 pH，記錄滴定量。反應進行時，儀器會補加鹼液，因此不能把「最後 pH 降低多少」當成主要定量依據。看到 pH-stat、自動電位滴定、脂肪酸中和或鹼液消耗等線索，應連結到血清脂解酶的測定。 三、340 nm 濁度法：測脂肪乳劑的變化 脂肪受質可製成乳劑，乳滴會散射光線，使反應液呈現混濁。脂解酶作用後，脂肪受質被水解，乳劑的分散狀態隨之改變；在本單元所指的濁度測定法中，反應液逐漸澄清，濁度下降，儀器讀取的表觀吸光度也隨之下降。 此法可在 340 nm 追蹤訊號，利用單位時間吸光度的下降量反映脂解速率。必須分清楚：「340 nm」是測量波長；「濁度變化」才是這個方法所監測的訊號來源。 NADH 與 NADPH 在 340 nm 具有吸收，是許多酵素測定常用的訊號分子；但使用相同波長，不代表反應原理相同。若方法描述的是脂肪乳劑受質的混濁程度改變，應判斷為 turbidity，而非直接選擇 NADH 或 NADPH。戊二酸（glutaric acid）也不是此濁度法所追蹤的訊號。 比較項目pH-stat 自動電位滴定法本單元的 340 nm 濁度法 反應基礎脂肪水解後釋出脂肪酸脂肪乳劑水解後濁度改變 儀器追蹤的訊號維持設定 pH 所需的鹼液量乳劑的表觀吸光度 活性判讀單位時間消耗的鹼量越多，活性越高適用測量範圍內，吸光度下降越快，活性越高 辨識關鍵字電位滴定、脂肪酸、中和、維持 pH340 nm、乳劑、濁度、turbidity 四、膽鹽：脂解酶試劑的重要線索 膽鹽具有親水與疏水的特性，可協助脂質受質在水相中乳化、分散，提供適合脂解酶作用的油水界面。因此，試劑添加 bile salt，是辨識脂解酶測定的重要線索。 應分清三種角色：被測定的是脂解酶活性；被水解的是脂肪受質；膽鹽則是試劑中的輔助成分。不能把膽鹽當作脂解酶、脂解產物，或直接認為檢驗是在測膽鹽濃度。 膽鹽對反應的影響與試劑配方、濃度及反應條件有關，因此不宜背成「膽鹽越多，脂解酶活性一定越高」。本單元需要掌握的是膽鹽與脂質受質處理及脂解酶測定的關聯。 五、容易混淆的酵素名稱 判斷檢驗項目時，先看受質與反應類型。澱粉酶（amylase）作用於澱粉類受質；γ-麩醯基轉移酶（GGT）涉及基團轉移；5′-核苷酸酶涉及核苷酸的磷酸酯水解。肌酸激酶（creatine kinase）及鹼性磷酸酶（alkaline phosphatase）也不符合本單元「脂肪受質、脂肪酸滴定、膽鹽」這組辨識線索。不要只因名稱含有「酶」，或檢驗與消化、肝膽有關，就混為同一測定原理。 常考陷阱 看到 340 nm 就選 NADH 或 NADPH：波長不能單獨決定答案。脂肪乳劑的測定情境應辨識為濁度變化。 把 pH-stat 當成測量 pH 下降幅度：儀器會持續補加鹼液以維持設定 pH；定量依據是鹼液消耗量與時間。 把滴定方向記反：脂解反應釋出脂肪酸，需加入鹼液中和，不是加入酸液中和。 把濁度變化方向記反：本單元的乳劑濁度法隨脂解進行而逐漸澄清，表觀吸光度下降。 把膽鹽當成受質或受測項目：膽鹽協助脂質受質乳化與分散；測定目標仍是脂解酶活性。 把特定方法套用到所有脂解酶檢驗：脂解酶有不同測定方法；340 nm 監測濁度是此處指定方法的特徵，不能推論所有脂解酶測定都使用相同波長或訊號。 記憶口訣 脂酸出，鹼來滴；乳濁退，看光值；膽鹽入，想脂解。 340 先看原理，乳劑變清選濁度。